常见问题解答

与样本相关的常见问题

问：我怎样才能得到免费的样品检测？

Spectradyne将很乐意通过免费测量您的几个样品来展示其技术的力量。填写此处的联系人表格，然后从下拉菜单中选择“请求样品尺寸”，即可与我们联系。在您提交表格后，我们将很快与您联系。

问：我如何在我的样品中使用控制珠？

简单的回答是--有很多种方法！要点是将已知大小和浓度的颗粒添加到要测量的样品中。使用MRPS，颗粒是一个接一个地测量，并且彼此独立，因此对照颗粒为现场绝对尺寸和浓度验证提供了测量中的参考。阅读我们关于这一主题的博客文章 ，了解更多关于这项技术的信息！

问：如何通过MRPS测量病毒滴度？

就像任何其他类型的纳米颗粒一样！Spectradyne的客户已经使用nCS1测量了广泛的病毒类型，包括慢病毒、腺病毒、流感和艾滋病毒。查看我们的 病毒应用程序页面，观看网络研讨会，或阅读以下博客文章了解更多信息：使用spectradyne的nCS1快速病毒滴度，或使用spectradyne的nCS1进行引人入胜的病毒测量。

问：我可以为我的样品溶液使用的最低电导率是多少？

我们建议使用单位强度的PBS(磷酸盐缓冲盐水)以获得最佳效果。对于与PBS显著不同的任何缓冲区，最佳做法是在建议的缓冲区中测量标准颗粒大小(最容易直接添加到样本中，或在单独的测量中添加)，以获得该类型样本的校准比例因子(可以保存以供将来使用)。我们已经成功地在稀释度为0.01x PBS的缓冲器中进行了测量；尺寸校准略有变化，噪声下限增加，但我们的仪器工作得很好。

问：我的样品溶液可以使用的最大电导率是多少？

使用nCS1^TM时没有最大电导率。然而，请注意，尽管电导率的增加确实会增加灵敏度，但它也可能会增加基线噪声。此外，如果电导率足够高于16毫秒/厘米(类似于1×PBS)，您可能需要为该缓冲器创建并存储一组单独的校准值(请参阅下面的常见问题解答，测量具有未知电导率的颗粒)。

问：我的样本中的颗粒浓度是多少？

许多颗粒标准出售时只提供有限的颗粒大小分布信息--通常只估计出溶液中原料固体的平均直径和重量百分比。要将这些值转换为以颗粒/毫升为单位的浓度估计值，请访问我们方便的在线计算器。这一计算只提供了数字浓度的大致估计，因为任何尺寸范围内的实际浓度取决于样品中详细的颗粒尺寸分布。要获得颗粒浓度的准确测量，您当然需要nCS1，您可以在此处请求。

问：我必须在我的样品溶液中加入Tween吗？

当需要添加表面活性剂时，Tween(也称为聚山梨酸酯-20)是我们的默认润湿剂，根据样品的不同，通常浓度在0.1%到1%之间。0.1%的牛血清白蛋白(BSA)和0.5mM的十二烷基硫酸钠(SDS)是交替使用的表面活性剂，无论出于什么原因，吐温对你都不起作用。您的样品可能已经含有蛋白质和外切体形式的天然表面活性剂，这可以消除对额外润湿剂的需要。

问：我如何在没有或很少使用表面活性剂的情况下测量样品？

对于大尺寸墨盒测量(即使用TS/C-900、TS/C-2000或TS/C-10k墨盒时-请参阅我们的墨盒地图)，不需要额外的表面活性剂。然而，对于较小尺寸的墨盒来说，墨盒的润湿性变得至关重要。为获得最佳结果，我们建议使用0.1%至1%的吐温(聚山梨酸酯-20)或0.1%的牛血清白蛋白(BSA)等表面活性剂制备样品，过滤至20 nm以减少背景颗粒的影响。

问：生成成功的测量方法的最佳实践是什么？

为了确保测量成功，首先要确保样品流体具有足够的导电性和足够的表面活性剂来润湿墨盒。在阳性对照的已知颗粒大小标准中加入尖峰。选择不会干扰样本颗粒分布并且至少比最大墨盒大小限制低10%的大小。将控制颗粒浓度设定为控制颗粒大小下样品中预期颗粒浓度的大约10倍。在与样品缓冲液相同或相似的稀释剂中制备对照颗粒。将样品稀释，使颗粒浓度在滤芯的浓度范围内。

问：我不知道我的样品里有什么。成功测量它的最好方法是什么？

为了成功地测量样品，您应该从向样品中添加控制粒子开始，直到开发出一种方法。首先测量最大尺寸的墨盒(即TS/C-2000或TS/C-900墨盒-请参见我们的墨盒地图)，以检查是否存在可能淹没较小尺寸墨盒的内部过滤器或测量通道的大颗粒。

根据我们的经验，如果滤筒类别中直径超过最大尺寸限制的颗粒总数超过1×10⁷ particles/mL，则会发生严重的过滤器堵塞。在这种情况下，请尝试稀释或过滤样品以降低大颗粒的浓度。

问：如何测量导电性未知的缓冲液中的颗粒？

如果缓冲器具有未知的电导率，则通常最好从测量未知缓冲器中的一些可由NIST追踪的大小标准开始。每个盒式模具的出厂默认尺寸和浓度比例因数基于1×PBS的电导率(16 mS/cm的电导率)，因此，如果使用的缓冲液具有未知的电导率，则可能需要制定特定于该缓冲区的比例因数。

这样做的步骤非常简单：首先将已知大小和浓度的珠子插入目标缓冲区，然后使用nCS1^TM进行测量。生成的数据被加载到nCS1 Viewer^TM软件中，在其中进行校正以显示已知珠子的适当大小和浓度，这将创建特定于未知缓冲区的大小和浓度比例因子。这些值被保存为该特定缓冲区的唯一校准。将来，任何时候在该缓冲器中测量样品时，只需加载所用缓冲器的存储校准，数据就会自动校正该特定缓冲器的导电性。

问：我如何计算出我的珠子标准的浓度？

颗粒标准通常只提供有关颗粒大小分布的有限信息。要将固体百分比和平均直径转换为以每毫升颗粒为单位的浓度估计值，请使用我们在网站上提供的方便的计算器。

*免责声明：由于任何大小范围内的颗粒的实际浓度取决于详细的颗粒大小分布，因此使用spectradyne的nCS1直接测量样品中颗粒的绝对浓度可获得最准确的结果！

问：我的样本中有多少是实际测量的，我如何确保结果能代表整个样本？

在所有颗粒分析测量中，必须假设样品颗粒均匀分布在被测介质中。如果样本是从大量供应中获取的，则应遵守由ISO-11648和许多其他标准组织制定的可靠的统计抽样协议，这些协议远远超出了本常见问题解答的范围。

虽然nCS1^TM指令要求在试剂盒中使用3μL的样品，但实际测量的量要小得多。从本质上讲，该系统通过纳米收缩将样品“吞下”，而大量样品则直接被丢弃。当人们进入较小尺寸的纳米收缩(NC)时，流速会变小，因此在相同的单位时间内，实际通过NC的样品比通过较大NC的样品要少。要记住的关键一点是，系统在逐个粒子的基础上测量通过NC的实际样本量；这不是估计！这就是为什么nCS1^TM始终提供比竞争技术更准确的浓度测量。记录在任何给定运行中测量的实际样品总量，并将其作为用户可访问的元数据与单个运行一起存储。

问：在运行缓冲区中有多山梨酸酯-我需要担心与我的样本的兼容性吗？

运行中的缓冲器直到检测后才会与样本接触；无需担心兼容性问题。

问：需要多少样本量？

要用nCS1^TM进行完整的测量，只需要3到5μL的样品体积，但使用TS/C-10k大小的色带盒时除外，在这种情况下需要10μL。要了解更多有关墨盒大小的信息，请查看我们的墨盒地图页面。

与仪器相关的常见问题

问：我如何订购墨盒？

我们期待着完成您的订单！首先，请在此处请求报价。

问：为什么每种类型的墨盒都有最小和最大颗粒浓度？

一般来说，人们应该使用nCS1^TM盒式磁带图作为指导。最大浓度是使用单分散校准球体通过实验确定的，因此应仅作为指南。具有连续颗粒大小分布的样品的行为可能不同于单分散的珠群。如果已知样品浓度(颗粒/毫升)，则建议从稀释到比图表上所示的最大值低大约2个数量级开始。例如，如果使用TS/C-400子弹，我们建议根据图表上显示的最大值1×10¹¹ particles/mL开始拍摄1×10⁹ particles/mL。如果样品的浓度未知，建议从非常稀释度开始，然后逐步上升，找到最佳浓度/稀释度。

药筒地图上显示的最低浓度只是一个指导方针。由于测量的颗粒数量是浓度和流速的函数，因此图表上显示的数字是基于能够在10分钟内测量~500个颗粒。如果您愿意在更长的时间内测量和/或满足于测量较少数量的颗粒，则可以测量较低的浓度。将10μL的分析物通过管道输送到色谱柱中，可以进行一小时以上的测量(取决于色谱柱的大小；尺寸较大的纳米压痕具有更高的流速，因此样品不会像具有较小纳米压痕的色谱柱持续时间那么长)。

问：我在NTA/DLS数据中看到的峰值在哪里，但在我的nCS1^TM测量中看不到？

在动态光散射(DLS)测量中，即使实际的颗粒分布 没有峰，DLS仪器也总是产生一个峰！DLS是一种系综方法：它只测量整个样品的平均颗粒尺寸以及多分散性(多分散性指数或PDI)的估计。DLS生成的图形并不像nCS1^TM那样是真实的粒度分布，因此它们所显示的“峰”也不是真实的。

在纳米颗粒跟踪分析(NTA)测量中，人们还可能经常在样品中看到nCS1^TM测量没有显示的“峰”。这是一个复杂的主题，我们邀请您阅读我们在该主题上发布的许多文档(请查看这份技术简介，或这张海报，或者这张海报)。归根结底，任何光散射技术都严重偏向于大颗粒，这是由于直径与光散射的第六级关系。在NTA中，这意味着在多分散样品中，较大的颗粒分散得如此之多，以至于它们遮挡了来自较小颗粒的信号，导致较小颗粒的测量浓度下降，进而在较低的尺寸范围内产生“假峰”。

问：我装上了墨盒，但前面板上的蓝灯没有亮起。我该怎么办？

如果您装入墨盒，但蓝色指示灯未亮起，请参阅仪器前面的按键提示卡上的插图。确保已正确装入墨盒，并按照卡片上的指示抓住了玻璃的前缘和后缘，并且墨盒平放在固定器的底部。如果蓝灯仍未亮起，请发送电子邮件至willnanobio@163.com与我们联系。

问：我应该在什么时候使用我的清洗磁带？

只有在仪器启动时，才应在第一次样品测量之前和关闭仪器时使用清洗磁带，以便为仪器加注燃料。不需要在每个样品之间使用清洁盒。

问：我无法让我的试剂盒装满分析物。我该怎么办？

如果您在将样本移送到试剂盒时遇到困难，可以在我们的网站上找到一段演示如何加载试剂盒的视频。如果样品在润湿微流控通道时遇到困难，可尝试添加少量润湿剂或表面活性剂。我们建议使用0.1%至1%的吐温(聚山梨酸酯-20)或牛血清白蛋白(BSA)。另一个要考虑的表面活性剂是十二烷基硫酸钠(十二烷基硫酸钠)。

问：Spetradyne的nCS1^TM微流阻式脉冲传感(MRPS)技术与NTA和DLS相比如何？

MRPS和NTA/DLS(纳米颗粒跟踪分析/动态光散射)之间的根本区别在于，MRPS是直接的电测量，而NTA和DLS都是间接的光学测量。NTA和DLS都使用光散射作为其测量的基础，因此它们测量的信号与颗粒大小的6次方成正比。这意味着所有的测量都严重偏向更大的颗粒尺寸。在DLS中，这意味着报告的平均大小将始终高于实际大小(非常单分散的种群除外)。在NTA中，这可能会在较小尺寸的分布中产生虚假的峰值，因为较大颗粒的散射掩盖了较小颗粒的散射(请查看本技术简报，或这张海报，或这张海报)。

除了DLS和NTA测量的散射信号偏向较大尺寸外，散射强度还取决于颗粒和悬浮介质之间的光学对比度(折射率差)。适用于高光学对比度粒子(金纳米粒子、聚苯乙烯珠子等)。这不会导致任何问题。然而，对于许多生物纳米粒子(蛋白质聚集体、胞外囊泡、噬菌体等)，这些粒子与悬浮介质的光学对比度几乎没有差别，这使得产生的散射很小，在某些情况下甚至是不存在的。最后，所有的光散射系统都必须假设所有的粒子都是球形的。

相反，MRPS是一种电学测量，不依赖于颗粒形状或材料特性，如折射率！每个颗粒都是单独测量的，不依赖于样品中其他颗粒的测量。

在我们的技术页面上可以找到不同纳米颗粒测量技术的详细讨论。

问：为什么会有这么多瓶子？

多好的问题啊！nCS1^TM通过使分析物流过纳米收缩管(NC)并电感测颗粒在NC内移动的导电缓冲液的体积来测量颗粒。通过将一些分析物流过位于色谱柱相反侧的流体电阻器(FR)，可以方便地进行测量。我们通过流动的缓冲液与试剂盒两侧的分析物进行正负电接触，缓冲液保持流动以带走废物分析物。没有经过FR和NC的分析物(主要是NC)从分析物井流向废物。          

现在我们可以看到为什么nCS1^TM有五个瓶子：我们独立地提供进出试剂盒两侧的缓冲，这需要四个瓶子，我们有第五个瓶子来存放分析物废物。通过调整所有六个墨盒端口的相对压力来精确控制通过墨盒所有部件的流体流动，除了提供用于运行缓冲液和分析物的源和转储外，瓶子体积还保持这些压力。由于分析物端口由我们的压力控制器持续控制，因此我们不需要为该端口配备瓶子。

问：激光在哪里？

nCS1^TM使用电子、非光学检测方法来逐一确定每个颗粒的大小和计数。因此，仪器中没有激光或任何其他光学元件。

与软件相关的常见问题

问：如何更新我的模具校准文件？

您的墨盒是在spectradyne预校准的，因此您不必亲自进行校准。模具校准文件包含将原始数据转换为样品中颗粒的大小和浓度信息的系数。
有两种方法可以将校准文件更新到最新版本：

• 如果你的电脑连上了互联网，只需找到并运行‘UpdateCal’应用程序。此应用程序位于Windows开始菜单的spectradyne工具文件夹中，将自动从spectradyne的服务器获取最新的校准文件，并将其放在您的计算机上的正确位置-全部完成！
• 如果您的计算机没有连接到互联网，请向我们发送电子邮件，以获取最新的CAL文件和将其放置在计算机上的位置的说明。因为spectradyne的支持团队总是在那里为你服务，所以这个选项也很简单！

问：nCS1如何测量和计算浓度？

Spectradyne的nCS1提供了可用的最直接的纳米颗粒浓度测量。以下是方法：

• 当粒子通过微流控盒内的纳米级传感狭窄时，它们被一个接一个地检测到。这可能以高达每秒数千个粒子的速度发生；
• 每次探测到粒子时，都会测量它通过狭窄处所需的时间--它的传输时间；
• 传输时间实质上是与传感收缩的体积相等的样品体积流过检测器所需的时间；
• 每次采集的平均颗粒通过时间被转换为样品的体积流率，使用结合了传感收缩的几何形状的盒特定的校准系数；
• 已知已测量的样品的总体积，任何给定大小范围上的浓度只需将该范围内检测到的颗粒数量除以总体积即可计算出来。

想学更多吗？阅读我们关于这个主题的博客文章！

问：浓度图中显示的误差条是什么意思？

nCS1^TM对单个粒子进行计数并调整其大小，从中计算作为粒子大小函数的浓度。浓度的不确定性，即误差条所代表的，反映了这一计数过程的统计数据。如果我们假设测量数据符合泊松分布，则大量粒子N的计数误差等于N^1/2。因此，大N比小N产生更小的分数误差；因此，一般的建议是计数更多的粒子。

一个细节是，当N变小时，误差被证明是不对称的，具有更大的正不确定性和更小的负不确定性。有关这一主题和该主题其他方面的更多解释，请参阅我们关于统计统计的技术简报。

问：为什么我可能会使用“背景减法”？它如何改善我的数据？

较小的粒子产生较小的电信号，比较大的粒子更容易被电噪声掩盖。因此，使用仪器标准的峰值参数和过滤器，很难在逐个事件的基础上将小粒子事件与电噪声区分开来。

为了获得更准确的浓度测量，接近给定墨盒的噪声底限，使用“背景减法”来估计和消除电气噪声。它的工作原理是这样的：nCS1^TM测量的原始信号由宽带电噪声和离散粒子过境事件组成，位于平坦的基线之上。电噪声在基线上方和下方是对称的，但物理粒子事件仅在基线的一侧产生峰值(如果查看原始数据，则向下)。背景减除法在基线两侧寻找峰值--在“真实粒子”一侧，真实粒子事件和电噪声假阳性事件都被计数，而在“非粒子”一侧，只有电噪声(假阳性)事件被计数。由于噪声在基线上和基线下是对称的，来自非颗粒侧的测量可以用来估计电噪声对从颗粒侧获得的颗粒尺寸计数的贡献。背景减去法通过减去在非粒子一侧测量的电噪声事件的有效浓度，从接近噪声底线的数据中消除电噪声的影响。